参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠p38MAPK及TNF-α、IL-4的干预作用

作者:贾育新;毕殿勇;段永强;明海霞;万生芳;程小丽;成映霞;呼会茹; 刊名:中医药学报 上传者:杜爱武

【摘要】目的:研究参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织p38MAPK、TNF-α及IL-4基因、蛋白表达的干预作用。方法:SPF级Wistar大鼠60只,按随机数字表法标记,按性别不同分笼饲养。取雌、雄大鼠各5只作为空白组,其余大鼠依据性别不同分笼饲养;采用复合因素+TNBS/乙醇刺激法(乙醇浓度50%)构建脾虚湿困型UC大鼠模型;造模成功后,依随机数字表法将模型大鼠分为模型组、参苓白术散低、中、高治疗组,剂量分别为6 g/(kg·d)、12 g/(kg·d)、24 g/(kg·d)及阳性对照组,柳氮磺胺吡啶组,SASP组0. 2 g/(kg·d),每组各10只,雌雄各半、分笼饲养。其余各组大鼠均以蒸馏水灌胃治疗,剂量:10 g/(kg·d),疗程3周,每日灌胃1次。免疫组化法检测各组实验大鼠结肠组织p38MAPK、TNF-α、IL-4的蛋白含量表达; RT-PCR法检测UC各组大鼠结肠组织内p38MAPK、TNF-α及IL-4的基因表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠结肠组织内p38MAPK、TNF-α蛋白含量、基因表达水平明显升高(P <0. 01或P <0. 05); IL-4的含量蛋白、基因表达水平显著降低(P <0. 01或P <0. 05);与模型组相比较,阳性对照组、参苓白术散中、高剂量组大鼠p38MAPK、TNF-α基因、蛋白表达水平降低显著(P <0. 01或P <0. 05); IL-4的蛋白含量、基因表达水平明显升高(P <0. 01或P <0. 05),尤以参苓白术散高剂量组及阳性对照组作用显著。结论:参苓白术散可明显调节脾虚湿困型UC大鼠病变部位结肠组织内p38MAPK、TNF-α及IL-4基因及蛋白表达的水平。

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溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis. UC)为一种临床多见的慢性、复发性疾患,其主要表现为迁延、复发性的腹痛、腹泻、里急后重,或伴有黏液脓血便等为主要临床症状、体征。溃疡性结肠炎主要病理改变多属累及直、结肠黏膜及黏膜下层的溃疡性病变,部分重症病例可发生巨结肠及穿孔等危重并发症。现代医学研究观点认为引起UC的病因尚不十分确切,但机体免疫功能失调被公认为UC的重要发病机制之一。相关研究证实炎症递质包括自身相关抗体、细胞因子,氧自由基和一氧化氮、体液免疫及环氧合酶与基质金属蛋白酶等多个方面在UC的发病中起到重要作用,其中尤以细胞因子及其参与的免疫应激反应已经成为UC发病机制的研究热点领域[1-2]。UC归属中医学“肠澼”“泄泻”“便血”“痢疾”等范畴,中医学认为脾胃虚弱、湿热蕴结是本病的基本病机,且在脾胃虚弱的基础上多伴有湿、热、痰、瘀血、毒邪等病理产物,故病情迁延难愈。治疗原则以健脾和胃,渗湿止泻为主,兼顾祛除湿热、毒瘀等邪气[3]。故本研究选用具有益气健脾、渗湿止泻为主要功效的参苓白术散为主要药物,以期探讨本方对UC实验大鼠结肠组织p38MAPK、IL-4及TNF-α基因及蛋白表达的作用机制。1实验材料1. 1实验动物SPF级健康成年Wistar大鼠60只,雌雄各半,分笼饲养体质量(180±20) g,购自于甘肃中医药大学实验动物中心(合格证编号:62001000000090:SYXK[甘]2011-0001);实验设施证书编号:(SYXK[甘]2011-0001-00000118)。实验动物饲养条件:雌雄各半分笼饲养,室内温度(23±2)℃,湿度45%~55%,给予动物灭菌标准饲料及灭菌纯净水,自由摄食、饮水。1. 2实验药物实验中所需中药饮片均购自于甘肃中医药大学附属医院中药房,参苓白术散药物组成人参、炒白术、白茯苓、薏苡仁、砂仁、莲子、桔梗、白扁豆、山药、陈皮、炙甘草,诸药配伍比例5∶5∶5∶3∶3∶3∶2∶4∶2∶5∶2。药物煎煮:首次煎煮以相当于药材量10倍之蒸馏水浸药2 h,煎煮2次,共计60 min,将两次所得中药煎液混合,加热浓缩至每1 m L含生药2 g的浓度,室温冷却,4℃冰箱贮存。柳氮磺吡啶片购自甘肃中医药大学附属医院西药房(SASP,上海信宜天平药业有限公司,国药准字H31020557,0. 2 g/片);精炼猪油:安徽徽名山有机农业科技开发有限公司。1. 3实验仪器及试剂三硝基苯磺酸(TNBS,Sigma公司,批号SLBK1620V); TRIzol Reagent (Invitrogen,批号:15596-018); RT-PCR逆转录试剂盒(Promega,批号:0000123564); RT-PCR实时荧光定量试剂盒(Promega,批号:0000157591); VELOCITY 18R型高速低温离心机(伯乐公司,美国); RT-PCR仪(型号CFX96,伯乐公司,美国); PCR仪(型号S1000,伯乐公司,美国); DF110型电子分析天平; PCR所用引物:β-actin(上海生工,批号:9400969792; 9400969791);p38MAPK引物(生工公司,上海,批号9400969796;9400969797);免疫组化p38MAPK、TNF-α、IL-4的一抗产地(北京博奥森生物技术有限公司p38MAPKLot:AG07117086S; TNF-αLot:AG09194335; IL-4Lot:AG07042938S); DAB显色试剂盒(Lot:K176904D北京中杉金桥);兔S

参考文献

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