铁皮石斛种子无菌法播种试验

作者:许雪梅;陈晓寅 刊名:浙江农业科学 上传者:周承东

【摘要】在组培培养中 ,铁皮石斛种子无菌播种 ,通常用次氯酸钠溶液浸泡 ,再用无菌水冲洗 ,在无菌条件下取出种子播于固体培养基上 ,其发芽率 70 %左右。本试验改液体灭菌为气雾灭菌 ,发芽率提高 2 0 %左右 ,此法操作简便、成本低、功效高 ,为无菌播种创造一条新路

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铁皮石斛又称铁吊兰、黑节草,为兰科多年生草本植物,是珍稀中药材,国家列为重点保护品种。铁皮石斛果实为蒴果,如梨形,有三条纵向裂缝,果实成熟时随裂缝裂开,数万粒黄色或淡黄色种子随风飘荡散落。这些细小的粉状种子的种皮内含有大量空气,不易吸收水份,适宜于随风和水流传播,但是铁皮石斛种子的胚是一团未分化的胚细胞,没有子叶和胚乳,没有营养物质,种子寿命很短,在自然状态下,发芽率很低,成苗更难。随着生物工程技术的迅速发展,组织培养工厂化育苗,解决了铁皮石斛的大量快速繁殖问题。目前科研单位对铁皮石斛种子的无菌播种,乃至所有兰科植物种子的无菌播种,一般采用次氯酸钠等液体灭菌,种子发芽率在70%左右。为了进一步提高铁皮石斛种子发芽率,改液体灭菌为气雾灭菌。以降低成本,提高效益。1材料与方法11种子刚采摘已成熟的铁皮石斛蒴果8颗分为2组:其中4颗没有开裂的为1组,编号为11、12、13、14;另4颗刚开裂的为2组,编号21、22、23、24。12药品气雾A(二氯异氰尿酸钠、高锰酸钾);气雾B(甲醛、高锰酸钾);15%的次氯酸钠;10%的次氯酸钠溶液;75%乙醇。13方法用75%乙醇擦蒴果3次,除去表面污物,凉干备用。取11、21号蒴果,用气雾A灭菌4h;取12、22号蒴果,用气雾B灭菌4h;取13号蒴果浸泡在15%次氯酸钠溶液中15min,然后用蒸馏水冲洗,再用无菌水冲洗3次(备用);取23号蒴果浸泡在10%次氯酸钠溶液中10min,取出用蒸馏水冲洗,再用水冲洗5次(已有少量种子从蒴果中散出);取14、24号蒴果于40W紫外灯下间歇灭菌3次,每次20min。将以上处理的蒴果种子置于超净工作台,再以紫外灯灭菌20min,在无菌条件下播于固体培养基上,培养基为改良KC,每号蒴果播种30瓶,于培养室培养,开始2d为暗培养,第3d开始给以光照,光照强度为20003000Lx白天温度为2537,晚上温度为2023。2结果和分析8颗蒴果种子播后5d均见淡黄绿色,播后24d原球茎顶部长出针状叶子,35d后随机抽样,考查结果(表1)发芽率为7118%9770%。表1不同处理的石斛种子的发芽率考查结果经方差分析与种子发芽率的F值测定表明,朔果开裂与未开裂的种子发芽率差异并不显著;从4种消毒处理的种子平均发率的新复极差测验结果,气雾A与气雾B,气雾B与10%次氯酸钠处理间无显著差异;气雾A与10%次氯酸钠处理的差异达显著水平;气雾A、气雾B、10%次氯酸钠与15%次氯酸钠处理的差异达极显著水平。3小结本试验主效有显著差异,气雾A发芽率最高,气雾A与10%次氯酸钠处理间有显著差异,与气雾B无显著差异。气雾A、气雾B、10%次氯酸钠处理与15%次氯酸钠处理有极显著差异。蒴果B开裂与否与主效无显著差异。故气雾消毒为兰科植物蒴果种子的消毒处理开创了一条低成本高效益的新途径。参考文献铁皮石斛种子无菌法播种试验@许雪梅$浙江中设药用植物开发有限公司!浙江绍兴310273 @陈晓寅$浙江中设药用植物开发有限公司!浙江绍兴310273铁皮石斛;;种子;;无菌处理;;发芽率在组培培养中,铁皮石斛种子无菌播种,通常用次氯酸钠溶液浸泡,再用无菌水冲洗,在无菌条件下取出种子播于固体培养基上,其发芽率70%左右。本试验改液体灭菌为气雾灭菌,发芽率提高20%左右,此法操作简便、成本低、功效高,为无菌播种创造一条新路[1]曾宋君,程式君,张京丽.赵逢畔五种石斛兰胚培养及其快速繁殖研究[J].园艺学报,1998,25(1):7580. [2]曾宋君,程式君.石斛的试管苗快速繁殖[J].中药材,1996,19(10).

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