铁皮石斛种子组织培养研究

作者:张华通;孙同高;林晓萍;张莹;王洪峰; 刊名:林业与环境科学 上传者:潘菊芬

【摘要】通过筛选铁皮石斛(Dendrobium candium)果实的最佳消毒方法、种子发芽和壮苗生根的最适培养基,从而达到提高铁皮石斛组织培养的增殖系数和试管苗质量的目的。结果表明:用0.1%的氯化汞溶液对铁皮石斛成熟果实消毒15 min,种子污染率最低,为10%;用1/2MS +水解酪蛋白1 g/L +马铃薯粉碎液100 g/L +蔗糖20 g/L +NAA 0.5 mg/L 的培养基进行种子培养,有利于铁皮石斛芽苗的生长,诱导芽苗数达5~6千芽/果;培养基1/2MS +水解酪蛋白1 g/L +马铃薯粉碎液100 g/L +蔗糖20 g/L +6-BA 0.5 mg/L,有利于铁皮石斛原球茎的增殖,且诱导原球茎数达6~7千个/果;铁皮石斛的最佳壮苗生根培养基为花宝1号1 g/L +花宝2号1 g/L +MS 铁盐+MS 维生素+NAA 0.2 mg/L +水解酪蛋白1 g/L +蔗糖20 g/L+香蕉粉碎液50 g/L +苹果粉碎液30 g/L +活性炭2 g/L,植株苗高达3~6 cm,根系数量有7~18条/丛。

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铁皮斗,为兰科(Orchidaceae)石斛属多年生附生草本植物[1_2],主要分布于中国安徽、浙江、福建省等地,是我国传统的名贵中药材,被列为“中华九大仙草之首”,具械細細雜繼麟值[3]。根据《中国药典》记载,铁皮石斛具有益胃生津、滋阴清热的功效,此外在抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力雜射y蹲丨關肖具有射_功效[4?。铁皮石斛的种子较小、无胚乳,自然条件下需与某些真菌共生才能萌发[7]。野生状态下,铁皮石斛繁殖速率低、生长缓慢,难以利用实生苗进行栽培,加上人为的过度采挖和生态环境被破坏,致使其野生资源已濒临灭绝_。组织培养是植物实现快速繁殖、人工栽培的最佳技术手段,该技术同样适用于铁皮石斛[IW1]。20世纪70年代,国内外已经开始铁皮石斛快速繁殖技术的研究,尤其是在组织培养、人工栽培技术等方面U2]。目前,铁皮石斛组织培养主要采用种子、无菌茎段、茎尖以及根等为外植体材料,且研究发现由种子诱导的原球茎质量较好n3]。本试验以铁皮石斛种子为材料进行组织培养,探讨了不同培养基配方对铁皮石斛种子生长发育的影响,以期获得铁皮石斛最适宜的组织培养条件,从而缩短铁皮石斛组培苗的生长周期,为大面积人工种植铁皮石斛提供有力的技术支撑。1材料与方法试验采用的铁皮石斛果实取自广东生态工程职业技术学院生物技术实验基地。1-2试验方法1.2.1铁皮石斛果实的选择选择铁皮石斛成熟果实,成熟时间一般在9月中旬一10月中旬,成熟果实果皮黄绿色、饱满(图1)。1.2.2铁皮石斛果实的消毒方法设置3种果实灭菌方法:(1)75%的酒精浸泡60s01%的氯化汞溶液浸泡15min无菌水冲洗4次;(2)75%的酒精浸泡60s2%的次氯酸钠溶液浸泡15min无菌水冲洗4次;(3)75%的酒精浸泡60s10%的次氯酸钙溶液浸泡15min无菌水冲洗4次。在无菌条件下,用手术刀及镊子轻轻剥开果实,露出种子后,用不锈钢匙将种子均匀撒播在 ffik^^^TTTrr4jjI注:上排是成熟果实;下排是未成熟果实:图1铁皮石斜果实1/2MS+NAA0.2mg/L+水解酪蛋白1g/L+马铃薯粉碎液!g/L+蔗糖2g/L培养基上,PH调至5.6。每种灭菌方法接种20瓶,接种25d后,观察不同消毒方法对种子污染率和发芽情况的影响。污染率(%)=污染的种苗瓶数/接种的种苗瓶数xlOO%1.2.3发芽培养基的筛选在超净工作台上,将铁皮石斛种子均勻铺于1/2MS+水解酪蛋白1g/L+马铃薯粉碎液!g/L+蔗糖20g/L的培养基上,pH调至5.6。培养基中分别添加植物激素NAA(萘乙酸).2、0.5mg/L和6-BA(6-苄氨基腺嘌呤).2、0.5mg/L,共4个处理,每个处理进行3次重复。培养180d后,对不同培养基中的种子诱导情况进行观察分析。1.2.4壮苗培养基的筛选取1.2.3中经过3次分瓶(约180~240d)形成的株高1~3cm的小苗,单株转接到壮苗生根培养基上,进行增殖壮苗生根培养。共设计5种培养基,pH均调至5.6,重复3&31号培养基:MS+NAA02mg/L+水解酪蛋白1g/L+马铃薯粉碎液100g/L+蔗糖20g/L;2号培养基:花宝1号1g/L+花宝2号1g/L+MS铁盐+MS维生素+NAA0.2mg/L+水解酪蛋白1g/L+蔗糖2g/L+马铃薯粉碎液100g/L;3号培养基:花宝1号1g/L+花宝2号1g/L+MS铁盐+MS维生素+NAA0.2mg/L+水解酪蛋白1g/L+蔗糖20g/L+香蕉粉碎液[00g/L;4号培养基:花宝1号1g/L+花宝2号1g/L+MS铁盐+MS维生素+NAA0.2

参考文献

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