风湿宁胶囊治疗类风湿关节炎机制的研究

作者:冯振宇;马小娟;孟霜;王虹娟;赵建平; 刊名:光明中医 上传者:赵瑛

【摘要】目的 观察风湿宁胶囊(FSN)对类风湿关节炎(风寒湿痹型)新西兰大白兔血清和关节滑液中白细胞介素IL-6、IL-17、IL-4、IL-10水平的影响,探讨其治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的可能机制.方法 雄性新西兰大白兔120只随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)组、风湿宁胶囊低剂量组、风湿宁胶囊中剂量组、风湿宁胶囊高剂量组,每组20只.除正常组外,其他组均制备RA风寒湿痹动物模型.治疗组分别给予风湿宁胶囊溶液、甲氨蝶呤悬浮液,正常对照组灌生理盐水.用药7天后用酶联免疫法测定各组血清及关节滑液中IL-6、IL-17、IL-4、IL-10的水平.结果 FSN 中、高剂量组和MTX治疗组血清及关节滑液的IL-6、IL-17较模型组明显降低(P<0.05),而FSN低剂量组IL-6、IL-17水平的下降不明显(P>0.05).FSN 各剂量组和MTX组中IL-4、IL-10水平较模型组均升高,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 风湿宁胶囊不仅能下调新西兰RA大白兔血清及关节滑液中过高的IL-6、IL-17水平,而且能上调血清及关节滑液中IL-4、IL-10的水平,提示风湿宁胶囊治疗RA的机制可能是通过平衡促炎因子和抗炎因子的效应进而散寒通络,降低关节滑膜炎症,缓解临床症状.

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类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis,RA)是一种病因尚未明确的慢性自身免疫炎性疾病,以慢性、对称性、多关节滑膜炎和关节外病变为主要临床表现,与环境、细胞、病毒、遗传、性激素及神经精神状 态等因素密切相关[1]。众多研究表明,在RA的发生发展中,炎症因子扮演重要角色,这些炎症因子通过作用于多种细胞并相互调节,形成一个复杂的网络,炎症因子网络的失衡促进了RA的发生和发展。风湿宁胶囊(FSN)有祛风散寒、通络止痛之效,我科前期临床观察显示,其在消除主要症状,改善并恢复关节功能,降低ESR、CRP以及RF阳性率方面,疗效显著。本研究从细胞因子角度入手,在成功建立新西 兰白兔RA风寒湿痹动物模型的基础上,研究散寒通络法对类风湿性关节炎血清及滑膜巨噬细胞表达因子的影响,进一步解释药理作用机制,以探讨其治疗RA的作用机理和关键环节,为临床应用风湿宁胶囊治疗RA提供科学依据。 1材料与方法 1.1实验动物 SPF级雄性新西兰大白兔,体质量约(2.50.5)kg,由山西医科大学实验动物中心提供,单笼饲养,自由饮水,颗粒饲料喂养,适应性喂养1周。1.2药品风湿宁胶囊由山西仁源堂药业有限公司提供,产品批号:20110314,规格:0.4g/粒。甲氨蝶呤片由通化茂祥制药有限公司提供,产品批号:20140102,规格:2.5mg/片。 1.3试剂和仪器 1.3.1试剂 葡萄球菌肠毒素B(SEB),美国Sigma公司,批号:S1126;弗氏完全佐剂,美国Sigma公司,批号:F0607;免疫级牛II型胶原,美国Sigma公司,批号:090402;ELISA试剂盒,美国LSBio公司,批号:L140906。 1.3.2仪器 美国biotekSynergy4多功能微孔板检测仪;LC-4012离心机,安徽中佳;-86超低温冰箱,中科美菱;BPX-162电热恒温培养箱,上海博讯;HHS21-8电热恒温水浴锅,上海博讯。 1.4方法 1.4.1动物分组 本实验将体质量约(2.50.5)kg雄性新西兰大白兔120只,动物适应性喂养1周后按照随机数字表法分为正常组、模型组、甲氨蝶呤对照组、FSN低剂量组、FSN中剂量组、FSN高剂量组,每组20只。 1.4.2模型制备 在新西兰大白兔胶原诱导性关节炎(CIA)的基础上给予风寒湿刺激及葡萄球菌肠毒素B(SEB)外涂制备RA风寒湿痹动物模型。具体方法:用0.1M冰醋酸溶解II型胶原(2mg/ml,4过夜),再与IFA(Sigma)同等体积混合,并加入卡介苗(3mg/ml),于冰浴中充分研磨、乳化,每只新西兰大白兔在双后肢膝关节髌骨下方,髌韧带旁穿刺点的部位,注射 胶原500ug于双膝关节腔内,7天后再注射胶原200ug作加强免疫。于第7~9天,每只新西兰大白兔膝关节周围及以下均匀涂抹纤维素糊各30ul(含SEB5ug),涂抹后再进行风寒湿刺激,每天刺激1次,每次持续1h,刺激条件为:风速18m/s,相对湿度100%,温度为7~10,共刺激9天。造模开始后每隔24h观察一次,观察每组新西兰兔的一般情况,直至造模成功。1.4.3给药造模成功以后,按“人和动物体表面积折算的等效剂量比率表”计算,用药组高中低剂量以4、2、1倍于临床等效剂量给药,分别灌胃风湿宁胶囊溶液,甲氨蝶呤组灌胃甲氨蝶呤悬浮液,各组均用生理盐水定容为10mL,正常对照组灌胃生理盐水10mL,1次/天,连续7天。 1.5观察指标及方法 末次给药24h后所有实验大白兔腹腔注射3%巴比妥钠0.3~0.4mL麻醉。剪开大白兔腹腔,10mL注射器心脏取血,室温静置1h,

参考文献

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