一株拮抗烟草青枯病菌的真菌的筛选与鉴定

作者:周晓见;陈毓遒;缪莉;董昆明;董夏伟;靳翠丽 刊名:生态环境学报 上传者:康微

【摘要】为寻找烟草青枯病的生防微生物,研究采用平板涂布法从重庆烟田健康土壤中分离根际微生物,纯化后得到了59株真菌。用滤纸片法从中筛选出1株对青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)有稳定拮抗效果的真菌,其抑菌圈为10.0 mm。其抑制活性优于或接近于近期发现的其他生防微生物。测定该株活性真菌的全细胞脂肪酸组成,进行菌落和分生孢子形态学观察,以及rDNA ITS区测序,结果表明:该菌株全细胞脂肪酸属性未被收录于TSBA6脂肪酸数据库,而根据形态学观察结果,以及对所获rDNA ITS区序列的分析,鉴定该株真菌为烟曲霉(Aspergillus fumigatus)。

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烟草青枯病是热带、亚热带地区烟草的重要病害,1880年该病首先在美国的北卡罗来纳州被发现,此后,在许多产烟国家逐渐演变为烟草上的重要病害,如日本、澳大利亚、韩国等。在中国,长江流域及其以南烟区该病普遍发生,其中发病面积较大、为害较重的有广西、广东、福建、湖南、浙江等省(自治区)及安徽省的皖南烟区、四川省的宜宾和泸州烟区等[1]。烟草青枯病病原为青枯雷尔氏菌(Ralstoniasolanacearum)。一旦发病即可造成全株死亡,对烟草的产量和质量影响极大,是烟草上一大毁灭性病害[2]。截至目前,仍然没有针对青枯病的特效方法[3]。目前主要采用的防治方法包括农业防治、化学防治和生物防治等。农业防治如轮作、培育和推广抗病品种等,但是烟株的抗性有一定的局限性,品种的抗性强弱受多方面因素制约,随着种植年限延长,抗性将逐年丧失;化学防治是利用药剂抑制青枯病,虽然能起到一定的作用,但是长期大量施用化学药剂容易使细菌产生抗药性,引起土壤质地变化,造成环境污染和烟草的药剂残留,严重影响人体健康[4]。生物防治选择性强,无污染,不易产生抗性,对人体无害,是一种具有广阔前景的绿色防治方法,因此,近年来青枯病的生物防治越来越引起国内外的重视[5-6]。目前,运用于青枯病生物防治的因子主要集中于青枯假单孢杆菌、链霉菌、假单胞杆菌、菌根真菌和芽孢杆菌等[7-12]。其中,寻找既可以不妨碍植物生长,又能防治青枯病等植物病害的植物根际促生细菌(PGPR)已经成为生防热点之一[13]。PGPR原来是指生存在植物根圈范围中,对植物生长有促进或对病原菌有拮抗作用的有益的细菌统称。而深入的研究发现,不仅原核微生物的某些放线菌或者细菌都可以起促生作用,而且作为真核微生物的许多真菌也同样具有具有促生功能。但研究者仍用PGPR来泛指包括细菌、放线菌和真菌在内的植物植物生长的作用[14]。但是,总体而言,促生真菌的研究相对较少[13]。本文的研究是从重庆烟区健康土壤中,从健康烟草根际分离、筛选和纯化出能抑制青枯雷尔氏菌的真菌,并对菌株进行分类鉴定。根际促生微生物。根际促生微生物能够在根际土壤中快速增殖,并能抑制有害微生物和位于根部表面的土壤中的致病菌,一些根际促生微生物还有刺激1材料与方法1.1供试病原菌本试验采用青枯雷尔氏菌(Ralstoniasolanacearum)作为指示病原菌进行拮抗实验,该菌种由江苏省固体有机废弃物资源化利用高技术重点实验室提供。1.2试验所用培养基TTC培养基:蛋白胨10.0g,葡萄糖10.0g,牛肉膏3.0g,酵母膏1.5g,TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)0.05g,琼脂15.0g,蒸馏水1000.0mL,pH7.07.2。PDA培养基:马铃薯200.0g,葡萄糖20.0g,琼脂15.0g,蒸馏水1000.0mL,自然pH。孟加拉红培养基:蛋白胨5.0g,葡萄糖10.0g,Na2HPO41.0g,MgSO40.5g,孟加拉红0.0333g,氯霉素0.1g,琼脂15.0g,蒸馏水1000.0mL,pH7.0。1.3土壤真菌的分离、纯化与保存选择重庆黔江未发青枯病的烟田的健康土壤,拨开表土取315cm的根际土壤,每样约100g,采样后带回实验室4冰箱保存。土壤样品经过分级稀释,涂布平板,接种至PDA培养基和孟加拉红培养基,28恒温培养箱中培养。每个稀释度重复3次。待平板上长出菌落后,挑取培养特征相异的单个菌落,待纯化完全后,用25%甘油保存于-80冰箱中。1.4拮抗真菌的筛选1.4.1真菌活性产物的粗提取将分离到的菌株接种于PDA培养基上,于28、120r

参考文献

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