Pax5基因在野生型斑马鱼全胚胎发育早期的表达

作者:姚冬静;舒莉萍;何志旭;马建娟;李涛;黄惠敏 刊名:第二军医大学学报 上传者:王昭昭

【摘要】目的为了深入了解在胚胎发育过程中,尤其是在早期B淋巴细胞的生成和中脑的发育过程中pax5基因可能的作用及其机制,选择斑马鱼作为实验动物,构建野生型斑马鱼pCS2+-pax5重组质粒,并观察pax5基因在野生型斑马鱼胚胎中的表达。方法提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼pax5基因片段,将得到的pax5基因片段和pCS2+质粒经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后,在T4DNA连接酶的作用下插入pCS2+质粒中,通过对重组质粒进行双酶切、菌落PCR以及插入片段序列测定鉴定后,经T3RNA体外转录体系合成地高辛标记的pax5基因的反义mRNA探针。将得到的探针用全胚胎原位杂交技术检测pax5基因在斑马鱼早期发育过程中的表达。结果成功构建pCS2+-pax5重组质粒并制备了pax5基因的反义mRNA探针,通过斑马鱼原位杂交技术,发现在斑马鱼受精后18~72小时(18~72hpf)胚胎头部的小脑、中脑后脑交界处均可观察到pax5基因阳性杂交信号;在24~72hpf胚胎的耳蜗均可观察到pax5基因的阳性杂交信号,且随着时相的增长其表达逐渐增多;在18~48hpf胚胎的脊索部位可见pax5基因的阳性杂交信号。结论明确了pax5基因在斑马鱼胚胎的脑部、脊索神经系统高表达,并首次证实其在耳蜗听神经的早期发育过程中有表达,可能对斑马鱼早期胚胎神经系统的发育起着某些至关重要的作用。

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第二军医大学学报 2012年1月第33卷第1期  http :// www . ajsmmu . cn Academic Journal of Second Military Medical University,Jan.2012,Vol.33,No.1 · 21 · DOI:10.3724/SP.J.1008.2012.00021 ·论 著· Pax5基因在野生型斑马鱼全胚胎发育早期的表达 姚冬静1,舒莉萍2,3,何志旭1,2* ,马建娟1,李 涛1,黄惠敏1 1.贵阳医学院儿科教研室,贵阳550004 2.贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心,贵阳550004 3.贵阳医学院免疫学教研室,贵阳550004   [摘要] 目的 为了深入了解在胚胎发育过程中,尤其是在早期B淋巴细胞的生成和中脑的发育过程中pax5基因可能 的作用及其机制,选择斑马鱼作为实验动物,构建野生型斑马鱼pCS2+ -pax5重组质粒,并观察pax5基因在野生型斑马鱼胚胎中的表达。 方法 提取斑马鱼胚胎总RNA 后经 RT-PCR 克隆斑马鱼 pax5基因片段,将得到的 pax5基因片段和 pCS2+ 质粒经 Eco RⅠ、 Xba Ⅰ双酶切后,在 T4 DNA 连接酶的作用下插入 pCS2+ 质粒中,通过对重组质粒进行双酶切、菌落 PCR以及插入片段序列测定鉴定后,经 T3RNA体外转录体系合成地高辛标记的pax5基因的反义 mRNA探针。将得到的探针用全胚胎原位杂交技术检测pax5基因在斑马鱼早期发育过程中的表达。结果 成功构建pCS2+ -pax5重组质粒并制备 了pax5基因的反义 mRNA探针,通过斑马鱼原位杂交技术,发现在斑马鱼受精后18~72小时(18~72hpf)胚胎头部的小脑、中脑后脑交界处均可观察到pax5基因阳性杂交信号;在24~72hpf胚胎的耳蜗均可观察到pax5基因的阳性杂交信号,且随着时相的增长其表达逐渐增多;在18~48hpf胚胎的脊索部位可见pax5基因的阳性杂交信号。结论 明确了pax5基因在 斑马鱼胚胎的脑部、脊索神经系统高表达,并首次证实其在耳蜗听神经的早期发育过程中有表达,可能对斑马鱼早期胚胎神经系统的发育起着某些至关重要的作用。   [关键词] 斑马鱼; pCS2+ 载体; pax5基因;反义 mRNA;原位杂交   [中图分类号] Q 132.4   [文献标志码] A   [文章编号] 0258-879X(2012)01-0021-05 Expression of pax5gene in wildtype zebrafish embryos YAO Dong-jing 1,SHU Li-ping 2, 3,HE Zhi-xu 1, 2* ,MA Jian-juan 1,LI Tao 1,HUANG Hui-min 1 1.Department of Pediatrics,Guiyang Medical University,Guiyang 550004,Guizhou,China 2.Tissue Engineering and Stem Cell Research Center,Guiyang Medical University,Guiyang 550004,Guizhou,China 3.Department of Immunology,Guiyang Medical University,Guiyang 550004,Guizhou,China [收稿日期] 2011-08-26    [接受日期] 2011-12-16

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