远志提取物对阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力的干预效果

作者:彭芳;崔渊博;宋文颖;张家薇;刘俊保;关方霞; 刊名:郑州大学学报(医学版) 上传者:黎真

【摘要】目的:探讨远志提取物对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆能力的影响.方法:将28只6月龄雄性AD模型小鼠随机均分为4组,对照组和A、B、C组.A、B和C组小鼠连续3个月分别口服远志提取物50、100、200 mg/(kg·d),对照组小鼠口服等量溶剂.3个月后,采用Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,采用ELISA法测定小鼠海马组织中可溶性与不溶性Aβ40、Aβ42含量及β分泌酶1(BACE1)、γ分泌酶活性,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测小鼠海马组织中脑啡肽酶(NEP)、胰岛素降解酶(IDE)、MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平,采用Western blot法检测小鼠海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、BDNF酪氨酸激酶受体B(TrkB)及磷酸化TrkB(p-TrkB)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)及磷酸化CREB(p-CREB)的表达水平.结果:与对照组相比,C组小鼠穿越平台次数增加、逃避潜伏期缩短(P<0.05);A、B、C组小鼠海马组织中可溶性与不溶性Aβ40、Aβ42含量降低,NEP、IDE mRNA及蛋白表达水平升高,BDNF、p-TrkB及p-CREB蛋白表达水平升高(P均<0.05),且C组小鼠上述指标的变化更明显(P<0.05).而3组小鼠海马组织中BACE1和γ分泌酶活性、MMP-9表达及TrkB、CREB蛋白表达水平无变化(P>0.05).结论:远志提取物可有效改善AD小鼠的学习记忆能力,促进Aβ降解与调节BDNF/TrkB信号通路可能是其分子作用机制.

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#通信作者:刘俊保,男,1966年3月生,博士,主任医师,研究方向:中西医结合,E-mail:Liu-371@sohu.com;关方霞,女,1969年2月生,博士,教授,研究方向:干细胞与再生医学、神经认知及调控,E-mail:guanfangxia@126.comEffectofradixpolygalaeonlearningandmemoryabilityofAlzheimer'sdiseasemicePENGFang1),CUIYuanbo2),SONGWenying1),ZHANGJiawei1),LIUJunbao3),GUANFangxia4)阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)是一种年龄相关的中枢神经系统退行性变化的疾病,以进行性学习记忆能力减退、语言功能障碍及人格改变等为主要临床表现。脑部病理特征主要包括淀粉样蛋白(-amyloid,A)沉积形成的老年斑、Tau蛋白过度磷酸化形成的神经元纤维缠结、神经元丢失、炎症反应等[1]。AD的发病机制复杂,可能涉及多条信号调节途径,迄今仍无特效疗法。采用具有毒副作用小、效果良好、多靶点作用的传统中药进行AD干预治疗的研究越来越广泛,可能成为有效治疗AD的临床策略[2]。远志提取物源自益智健脑中药远志,含有皂苷、寡糖脂类等多种活性成分,具有提高记忆、抗炎、抗衰老等神经保护作用。目前研究[3-5]发现,远志提取物可明显提高AD模型小鼠的学习记忆能力并改善脑部A沉积,但其作用机制仍不明确。该研究采用远志提取物干预AD模型小鼠,从行为功能学、生化与分子生物学水平观察干预效果并探讨可能的分子作用机制。1材料与方法1.1主要试剂及仪器远志购自山西亳州百川药业有限公司。远志提取物由远志经体积分数75%乙醇浸泡、超声破碎、残渣过滤、茄型瓶旋蒸得到的膏状提取物。经聚乙二醇加蒸馏水溶解获得[6-7]。A40、A42、分泌酶1(BACE1)与-分泌酶ELISA检测试剂盒,匀浆器,T-PER试剂等均购自ThermoFisher公司;Trizol,cDNA反转录试剂盒,荧光定量PCR试剂盒购自TaKaRa公司;-actin、脑啡肽酶(neprilysin,NEP)、胰岛素降解酶(insulin-degradingenzyme,IDE)、基质金属蛋白酶9(matrixmetallopro-teinase9,MMP-9)、脑源性神经营养因子(BDNF)、BDNF酪氨酸激酶受体B(TrkB)及磷酸化TrkB(p-TrkB)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-responseelementbindingprotein,CREB)及磷酸化CREB(p-CREB)兔抗鼠一抗,羊抗兔二抗,PVDF膜,脱脂奶粉,发光试剂盒等均购自Sigma公司。1.2动物来源及实验分组清洁级C57BL/6淀粉样前体蛋白(amyloidprecursorprotein,APP)转基因小鼠购自中国协和医科大学动物所,合笼繁殖,饲养于全自动独立送风笼具,选取6月龄、经PCR分子鉴定为APP+的雄性仔鼠用于实验。将28只雄性APP+小鼠(体重24~30g)随机均分为4组,每组7只。A、B和C组小鼠口服200L(1次/d)远志提取物,剂量分别为50、100、200mg/kg,持续3个月;对照组口服200L溶剂。1.3小鼠学习记忆能力检测3个月连续干预后,采用Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力。水迷宫水池直径为120cm,高度为40cm,共4个象限,平台直径和高度分别为15cm、28cm。平台首先放在第一象限,水面高度略没过平台

参考文献

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