Bit1蛋白对胰腺癌细胞恶性生物学行为的影响及其临床指标的相关性分析

作者:黄帅;袁达;郭俊超;张太平;赵玉沛; 刊名:中华外科杂志 上传者:张达才

【摘要】目的 探讨Bit1蛋白对胰腺癌细胞运动、迁移、侵袭等恶性表型的影响及临床相关指标的相关性分析.方法 通过real-time PCR和免疫印迹法验证6株胰腺癌细胞株中Bit1蛋白的表达情况,分别挑选Bit1表达量最高和最低的胰腺癌细胞株作为细胞功能调节的工具细胞.采用polyHEMA铺皿实验构建胰腺癌细胞悬浮培养的模型,检测Bit1对胰腺癌细胞失巢凋亡的影响;利用Transwell实验观察Bit1对胰腺癌细胞运动迁移和侵袭能力的影响;通过免疫印迹法和共焦显微镜下观察Bit1对胰腺癌细胞上皮间质转化(EMT)表型过程相关分子标志物的影响;制作术后胰腺癌患者癌和癌旁组织微阵列并进行免疫组化染色,分析Bit1与胰腺癌患者临床病理特征的相关性.结果Bit1在胰腺癌细胞株PANC1中的表达量(基因:3.13±0.40,蛋白:1.77±1.00)最高,在Mia paca2中的表达量(基因:1.00±0.35,蛋白:0.23±0.45)最低.失巢凋亡检测结果显示,Bit1过表达可促进悬浮培养胰腺癌细胞Mia paca2的凋亡,而在PANC1细胞中敲减Bit1之后失巢凋亡受到抑制;Transwell实验检测结果提示,Bit1敲减之后胰腺癌细胞的运动、迁移及侵袭能力明显大于对照组(P<0.05),而Bit1过表达之后可受到明显抑制(P<0.05);免疫印迹法和共焦显微镜下观察证实Bit1敲减之后EMT过程的间质表型N-cadherin及Vimentin的表达上调,而上皮表型E-cadherin下调,相关转录因子β-catenin的表达也是上调的,Bit1过表达之后结果相反;Bit1的差异性表达与胰腺癌患者肿瘤的神经浸润相关(P<0.05).结论 Bit1可负向调控胰腺癌细胞的失巢凋亡发生及其运动迁移及侵袭能力,其对胰腺癌细胞恶性生物学行为的调控作用与EMT过程密切相关. 胰腺癌患者肿瘤中Bit1蛋白表达与肿瘤的神经浸润存在相关性.

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中华外科杂志 2017年 11月第 55卷第 11期 Chin J Surg,November 2017,Vo1.55,No.11 Bitl蛋白对胰腺癌细胞恶性生物学行为的 影响及其临床指标的相关性分析 黄帅 袁达 郭俊超 张太平 赵玉沛 【摘要】 目的 探讨Bitl蛋白对胰腺癌细胞运动、迁移、侵袭等恶性表型的影响及临床相关指 标的相关性分析。方法 通过rea1.time PCR和免疫印迹法验证6株胰腺癌细胞株中Bitl蛋白的表 达情况,分别挑选 Bitl表达量最高和最低的胰腺癌细胞株作为细胞功能调节的工具细胞。采用 polyHEMA铺皿实验构建胰腺癌细胞悬浮培养的模型,检测 Bitl对胰腺癌细胞失巢凋亡的影响:利用 Transwell实验观察 Bitl对胰腺癌细胞运动迁移和侵袭能力的影响:通过免疫印迹法和共焦显微镜下 观察 Bit1对胰腺癌细胞上皮间质转化(EMT)表型过程相关分子标志物的影响:制作术后胰腺癌患者 癌和癌旁组织微阵列并进行免疫组化染色,分析 Bitl与胰腺癌患者临床病理特征的相关性。结果 Bitl在胰腺癌细胞株PANC1中的表达量(基因:3.13±0.40,蛋白:1,77±1.O0)最高.在Mia paca2中的 表达量(基因:1.00_+0.35,蛋白:0.23±0.45)最低。失巢凋亡检测结果显示,Bitl过表达可促进悬浮 培养胰腺癌细胞 Mia paca2的凋亡,而在 PANC1细胞中敲减 Bitl之后失巢凋亡受到抑制;Transwel实 验检测结果提示 ,Bitl敲减之后胰腺癌细胞的运动、迁移及侵袭能力明显大于对照组(P<0.05),而 Bitl过表达之后可受到明显抑制(P<O.05);免疫印迹法和共焦显微镜下观察证实 Bit1敲减之后 EMT 过程的间质表型 N—cadherin及 Vimentin的表达上调.而上皮表型 E—cadherin下调.相关转 录因子 3-catenin的表达也是上调的,Bitl过表达之后结果相反;Bitl的差异性表达与胰腺癌患者肿瘤的神经 浸润相关(P<0.05)。结论 Bitl可负向调控胰腺癌细胞的失巢凋亡发生及其运动迁移及侵袭能力, 其对胰腺癌细胞恶性生物学行为的调控作用与 EMT过程密切相关。胰腺癌患者肿瘤中 Bit1蛋 白表 达与肿瘤的神经浸润存在相关性。 【关键词】 胰腺肿瘤; 肿瘤转移; 失巢凋亡 Bitl mediates the malignant behaviors in pancreatic cancer and its potential clinical signifcance Huang Shuai,Yuan Da,Guo Junchao,Zhang Ta@ng,Zhao Yupei.Department of General Surgery,Peking Union Medical Colege Hospital,Chinese Academy of Medical Sciences,Peking Union Medical Colege,Beijing oo73o.China Corresponding author:Zhao Yupei,Email:zhao8028@263.net 【Abstract】 0bjective To investigate the potential role of Bitl in the pathogenesis of pancreatic ductal cancer c

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