结直肠癌石蜡切片行免疫组化染色后的DNA质量评估

作者:刘左源 刊名:全科口腔医学杂志(电子版) 上传者:孙平

【摘要】目的探究结直肠癌患者以石蜡切片后通过免疫组化染色对DNA质量的影响;方法本次研究针对2018年1月~2019年1月我院收治结直肠癌患者25例为目标;包括结肠癌患者13例;直肠癌患者12例;均经过石蜡固定切片后以免疫组化染色;提取DNA信息;检测CTNB1基因及CDH1甲基化检测;结果25例患者经石蜡切片、免疫组化染色后均顺利提取DNA;其中96.00%的DNA完整性、浓度、质量符合标准;同时顺利完成后续检测工作;结论对于结直肠癌患者来讲;如样本量很难获取或数量较低;通过石蜡切片、免疫组化染色可高质量提取DNA;分析靶基因游离分子;值得推广;

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2019年 3月 第 6 卷/第 8 期 Vol.6, No.8 Mar. 2019 全科口腔医学电子杂志 Electronic Journal Of General Stomatology 135 结直肠癌石蜡切片行免疫组化染色后的DNA质量评估 刘左源 (南京市高淳人民医院,江苏 南京 211300) 【摘要】目的 探究结直肠癌患者以石蜡切片后通过免疫组化染色对DNA质量的影响。方法 本次研 究针对2018年1月~2019年1月我院收治结直肠癌患者25例为目标,包括结肠癌患者13例,直肠癌患者12例, 均经过石蜡固定切片后以免疫组化染色,提取DNA信息,检测CTNB1基因及CDH1甲基化检测。结果 25例 患者经石蜡切片、免疫组化染色后均顺利提取DNA,其中96.00%的DNA完整性、浓度、质量符合标准,同 时顺利完成后续检测工作。结论 对于结直肠癌患者来讲,如样本量很难获取或数量较低,通过石蜡切片、 免疫组化染色可高质量提取DNA,分析靶基因游离分子,值得推广。 【关键词】结直肠癌;石蜡切片;免疫组化染色;DNA质量 【中图分类号】R735.34 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8803.2019.8.135.02 结直肠癌属于我国临床较为常见的一种恶性肿瘤疾 病,其治疗以手术为主,将病灶组织完全切除,同时辅以 药物化疗或射线放疗。最近几年,伴随着医疗水平的提 高,化疗药物靶向作用越来越强,极大程度延长了患者的 生存年限。那么,结直肠癌分子检测工作至关重要,能够 了解患者基因变化,便于选择更佳治疗方案[1]。但是,多 数结直肠癌中晚期患者因样本获取较难,且多用于免疫组 化染色方面,很难留存标本进行分子检测,从而不利于患 者药物选择。本文以2018年1月~2019年1月我院25例结直 肠癌患者为对象,分析经石蜡切片、免疫组化染色后对 DNA信息提取的影响,具体如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 本次研究针对2018年1月~2019年1月我院收治结直 肠癌患者25例为目标,男性患者总计14例,女性患者总 计11例,患者年龄最小为33岁,最大为80岁,平均年龄 (36.8±2.3)岁,病程时间短则1年,长则8年,平均病 程(2.4±0.3)年。其中包括13例结肠癌患者,12例直肠 癌患者。本次研究患者均自愿参与,签署同意书。 1.2 方法 此次所用设备包括:DNA提取试剂盒、甲基化处 理试剂盒等;所用试剂包括:免疫组化剂、PCR反应 液等。 免疫组化染色具体过程为:提取患者病灶组织样 本,经石蜡固定切片,后脱蜡、水化,利用高温引导、 修复抗原,修复液选择浓度10%的柠檬酸盐缓冲液,温 度设定为100℃以上,时间约3~15分钟,后于每张切片 上滴注100 ul一抗,放入恒温箱中保存24小时,恒温箱 温度约4℃。次日以磷酸盐缓冲液冲洗,放入显色剂内显 色,通过苏木精、伊红染色,逐层以酒精脱水,放入树 胶内封固。 提取DNA:将石蜡切片、免疫组化染色后的样本放 于光学显微镜下观察,留存影响结果,后将4张切片浸润 于二甲苯溶液内脱离盖玻片,一般需48小时左右,以医 用乙醇进行漂洗,置于室内常温下干燥,刮取载玻片回 收组织。将其装入1.5 ml离心管提取DNA信息,保证纯度 A260/A280低于1.8超过2.0,放于-20℃恒温箱内保存[2]。 检测CTNNB1:遵照相关标准处理,参照基因序列 设置上游、下游引物,以紫外线对扩增片段进行鉴定。 检测CDH1甲基化:将获取的DNA遵相关要求处 理,PCR条件参数设定为10

参考文献

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