唾液分析的临床应用价值及研究进展

资源类型:pdf 资源大小:351.00KB 文档分类:医药、卫生 上传者:谢常红

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【作者】 周志芳  夏运成 

【关键词】唾液 分析 应用价值 进展 

【出版日期】2010-02-25

【摘要】唾液是由舌下及口腔粘膜的小唾液腺分泌的一种体液,与其它体液如血液、尿液等样品一样,内含物质极为丰富,且与血液中的相应成分有很好的相关性。尤其是唾液样本容易采集,影响因素少。近年来国内外学者就有关对唾液的临床应用研究常有报导,其研究范围主要分布在蛋白质酶类、肌酐、尿酸、尿素、基因分析等领域,故具有很好的应用前景。本文简要综述近年国内外关于唾液标本的收集及分析方法和检测项目、应用前景与研究进展和小分子尿毒素(UN、Cr、UA)的分析在肾脏疾病中的临床意义。

【刊名】实用预防医学

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唾液是排泄和清除各种物质的主要途径,因此唾液可作为一种临床疾病诊断性样品。唾液的化学成分复杂,有些成分与血浆关系密切,如UN、Cr、UA、无机盐和某些类固醇激素等。唾液标本采集方便,容易规范,具有快速、经济、贮存与携带方便和无创性等特点,因此常可作为无创检测的标本来源。本文就目前国内外对唾液分析在临床上的应用价值及研究现状和前景作如下综述。1唾液的分泌功能与成分唾液是由涎腺产生分泌排出体外的一种混合液。人类有三对大涎腺:腮腺、颌下腺及舌下腺。这些腺体有长的导管系统排出唾液,其中90%的唾液是由腮腺和颌下腺分泌,5%为舌下腺分泌,5%~10%为口内小涎腺分泌。人体每天分泌的唾液有80%~90%都是由于刺激而产生,其刺激方式主要是味觉和进食时的咀嚼。因此唾液分泌主要是在白天。唾液中99%以上是水,人体每天可分泌唾液600~1000ml。唾液中某些成份与血液相仿,因此,测定唾液中这些物质的含量对相关疾病的诊断及治疗效果的评估有着重要的临床意义。唾液的分泌量往往受许多因素影响,其中包括一些生理状态的影响,主要有以下几点[1]:(1)生物结:清晨6时最低,到9时逐渐升高,至下午4时达高峰,以后又下降。(2)性别与年龄:男性大于女性。随着儿童生长发育,分泌量有增长,至17岁左右即达成人水平,成人中随年龄增长有呈下降趋势。(3)生理刺激及精神因素:咀嚼,味觉,嗅觉均可使唾液分泌增多。精神压力,如焦虑等可抑制唾液分泌。唾液中的无机盐离子主要有钠、钾、氯、钙、磷酸根和碳酸氢根等离子,并且离子浓度随刺激类型和唾液的流速而变化。有机物主要是葡萄糖和蛋白质,其中酶类主要有淀粉酶、核酸酶、过氧化酶、溶菌酶和酸性磷酸酶等。唾液中还有凝血因子、血浆白蛋白、氨基酸、UN、Cr、UA、脂肪酸、皮质类固醇和免疫球蛋白IgA、IgG、IgM等。UN、Cr和UA是目前临床研究较多的物质,UN、Cr和UA均为小分子量含氮化合物,分子量在几十到几百D之间,在唾液中的浓度随着血液中相应成分浓度的变化而变化。大量研究表明唾液UN、Cr和UA的水平可以反映血液中相应物质的变化,有一定的相关性,它们的测定对肾脏疾病的检测和疗效监测具有重要的临床意义和应用价值[2~4]。2标本采集唾液标本的采集可分为非刺激性采集和刺激性采集。2.1非刺激性采集主要是指不采用任何刺激条件让唾液自然流出的方式收集唾液。唾液从下唇自然流入漏斗,然后放进刻度管内保存备用。2.2刺激性采集唾液刺激性采集的方法主要有以下几种;(1)采用咀嚼一些对实验结果无影响的物质如橡胶管或石蜡等方法,然后让唾液自然流出,收集于干净容器内保存。(2)采用真空吸引器套吸管连续地从口腔底部吸取唾液。(3)用酒石酸、柠檬酸、维生素C或柠檬汁等刺激舌根,然后让唾液自然流出。从分泌效果观察,临床以10%柠檬酸溶液1~2滴置于舌根下刺激采集唾液的方法较常用。但刺激性采集唾液,唾液的分泌速度会加快,唾液的pH值可能会上升,总蛋白、淀粉酶和钠离子浓度会增高。无机磷、UN、IgA及一些药物浓度会降低。有研究采用2%的柠檬酸溶液,将无菌棉签浸湿然后压在患者舌根下方刺激后收集流出的清亮唾液,实验证明此法简单,干扰因素少,病人易接受。(4)唾液采样器收集法:用Qraswce唾液采样器放入口腔内下颊和齿龈之间,来回刷洗20次。然后闭口含2min,取出采样器,插入含有保护液的塑料管内,折断采样器棒过长部分,盖紧塞子,置于塑料袋内保存。临用时,从袋内取出采样器,折断采样器顶端的塑料头,将塑料管加入离心管内,2500rpm离心15min,使唾液从采样器塑料管内流入离心管,吸出离心后的唾液备用。此方法操作繁琐,不经济,患者不易接受,故临床较少应用。3唾液主要成分的研究现状3.1尿素血清尿素是体内氨基酸分解代谢的最终产物之一,在肝内合成,通过血液运输至肾脏排出体外。尿素是一种小分子,能够透过细胞膜均匀分布于机体体液。在肾功能受损时尿素排出障碍,常引起血液尿素浓度升高。唾液中尿素浓度大体可反映出血中浓度。目前测定尿素的方法有二乙酰一肟(DM)法、尿素酶-靛酚法(UIG法)、1,2-二甲基肉桂醛试纸法(CA法)、尿素酶和指示剂法(U—BCG法)等。有研究显示U—BCG法唾液和血浆中尿素氮浓度的相关性为:Y=0.93y=1.03+3.05(n=56)[3]。3.2免疫球蛋白由于唾液中免疫球蛋白的含量较低,故宜采用较敏感的方法,临床上常采用酶联免疫吸附法(ELISA)[5]。ELISA因其操作简便,费用较低而应用较多。在唾液样本免疫球蛋白的检测亦采用酶联免疫转移印迹法(EITB),此方法敏感性与特异性均高,但操作复杂,费用较高,多用于研究工作。直接凝集试验(DAT)检测唾液特异性IgG抗体曾被用来诊断黑热病。此外,亦有将染料实验(DT)用于诊断唾液中抗刚地弓形虫抗体的报道,并取得了较好的效果。3.3Cr Cr是肌肉组织中肌酸或磷酸代谢的最终产物,是体内的一种废物,在体内由肾脏排出体外。在肾功能受损时,排出受阻引起血Cr浓度增高。临床上Cr的测定多采用碱性苦味酸法,是一项临床了解肾功能的重要指标之一。测定血清中Cr浓度已成为临床判断慢性肾功能不全(CRF)患者肾功能的重要指标。Cr是一种小分子,能够透过细胞膜引起唾液中Cr含量变化,因此测定唾液中的Cr可以用来评估肾功能。国外研究得出结论,在健康人中,唾液肌酐的浓度是血中的10%~15%。在肾病患者中97.7%肾病患者血Cr浓度超过120μmol/L,唾液Cr也随之增高。因此,检查唾液中肌酐浓度可以用来反映血清中Cr浓度[6]。3.4UA UA是嘌呤核苷酸代谢的最终产物,其中小部分被肝脏分解破坏,大部分经肾脏排泄,约有25%~30%经消化液从胃肠道排泄。临床测定方法为DHBS酶法,在肾功能减退时常伴有血清UA浓度升高。唾液中UA浓度与血中UA浓度有很好的相关性,因此测定唾液中的UA浓度能够反映血中UA的浓度[7]。3.5淀粉酶淀粉酶主要经肾脏排出,在肾脏疾病中,由于淀粉酶排出减少,会引起血清淀粉酶活性增高。肾功能损害患者唾液淀粉酶活性与血清和唾液Cr浓度有很好的相关性,故唾液淀粉酶检测是肾功能检测的一项简单方法。唾液淀粉酶的测定,一般将唾液1:100稀释,检测方法与血清淀粉酶测定相同。由于唾液淀粉酶的影响因素较多,个体差异大,因此临床上只能作为一种粗筛方法。3.6葡萄糖为寻求一种无创性检测糖尿病人血糖控制状况的方法,国内外对唾液葡萄糖的研究常有报道。唾液中葡萄糖含量较低[8],仅为血糖的1/100~1/50,对检测方法的精密度、准确度要求高故对结果影响很大。文献普遍对直接套用血糖的检测方法持不同意见。Gugh等[9]采用的高效离子交换色谱法[8]测定葡萄糖准确度很高。张厚意报道[10]使用OlympusAU2700高精密度自动化分析仪及配套血糖检测试剂盒,将样品用量加大为血浆量的12.5倍,增加了反应液单位容量中葡萄糖的含量,可提高检测的灵敏度,检测误差很小,但仪器昂贵,操作繁琐,不适合国情,普及困难。3.7其它检测肾病综合征患者唾液中的IgA和IgG较正常人唾液中相应成分显著低下,说明肾病综合征患者的免疫力低下[11]。而且免疫球蛋白的含量与病情呈负相关。肾细胞癌患者未接受治疗时唾液中钙离子、镁离子和磷酸盐浓度会升高,总蛋白浓度下降,接受治疗的患者只有磷酸盐升高[12]。在慢性肾衰病人及透析病人的唾液与血清中做β2微球蛋白的检测,在慢性肾衰病人中R=0.50,在血透病人中为R=-0.18,所以血透病人无太多相关性,而在慢性肾衰病人中,唾液检测β2微球蛋白是一种可靠的方法,可以反映血清中β2微球蛋白的水平[13]。高磷血症在肾衰和透析病人中可导致心血管钙化从而诱发高的死亡率,肾衰及肾衰透析病人的唾液中磷酸盐水平可反映血中水平,从而可以检测唾液中的磷酸盐来治疗高磷血症。4唾液分析的临床应用前景及研究价值4.1干燥综合证(SS)SS是一种系统性自身免疫性疾病,其临床诊断通常通过检测自身抗体及涎腺活检来确定。早在1990年,Mandel[14]就曾指出SS引起的唾液腺结构改变可导致唾液中脂类含量的明显变化,磷脂的浓度呈20倍增加,如能在较大人群中证实,这将是有价值的诊断基础。Tisher等[15]用放射量学分析法检测SS患者唾液和血液透明质酸(HA)的含量,发现SS患者唾液HA含量明显高于正常人和口干症状组(P<0.05),而血液中无明显差别,因此唾液HA含量检测对SS的诊断与治疗具有重要诊断价值。4.2内分泌疾病Marchetti等[16]发现唾液和血清中胰岛素含量有明显的相关性。检测唾液免疫活性胰岛素可快速、方便地估算其血浆游离胰岛素水平进行临床评估与动态监控。学者Van Griensven等[17]认为,皮质醇、脱氢异雄酮、雌二醇、雌激素三醇、孕酮和睾丸激素等类固醇均可以从唾液中精确测量出,这些指标对预测儿童及青少年成长发育、经前焦虑症、评估卵巢功能、预测足月生产以及早产风险等具有重要意义,测定唾液中雌二醇含量是一种很有前途的预测排卵期的方法。4.3肝炎(1)甲型肝炎:法国PaulBrousse医院Mackiewicz等[18]认为分子水平上通过用PT—PCR技术把唾液用于甲型肝炎暴发时的流行病学调查是非常有价值的。Mackiewicz等检测了唾液中所含的甲型肝炎病毒及其对于序列研究的可靠性对唾液标本在诊断HAV感染时的临床价值已得到进一步证实。Oba[19]检测了25例甲型肝炎患者血清抗-HAVIgM抗体和唾液抗-HAVIgM、抗-HAVIgG抗体,结果发现上述3种抗体的敏感性分别为100%、82.11%和80.18%,特异性均为100%。(2)乙型肝炎:最近Zhevachevsky等[20]对HBV感染患者的唾液标本中的HBsAg和HBeAg进行了动态观察,发现在肝炎急性期唾液与血清HBsAg阳性检出率相一致,并且HBeAg唾液阳性检出率还要高于血清,显示唾液标本对乙肝的诊断具有重要价值。(3)丙型肝炎:Elsana等[21]研究发现90%抗-HCV血清阳性患者唾液抗-HCV阳性,血清抗-HCV阴性者唾液抗-HCV均阴性。这些发现提示唾液替代血清用以检测抗-HCV不仅具有诊断意义,而且还可用于流行病学调查。4.4艾滋病美国OraSure公司出品的OraQuick HI V1/2快速检测试剂就是一种通过快速检测HI V感染的快速检测试剂。在2004年10月-2005年12月期间,在印度塞瓦格兰姆的一个郊区附属医院对有450名疑似HI V感染者进行检测时发现450人中146人是血清学阳性感染者。经过OraSure公司的两种快速检测试剂对唾液和指血的检测灵敏度均为100%,特异性检测:唾液特异性(100%)比指血特异性(99.7%)更高。结果表明,唾液快速检测试剂比指血快速检测试剂效果更好,且易于接受[22]。4.5肾病国外早在1996年就有学者报道[23],唾液中的Cr浓度测定对肾脏疾病的诊断和疗效观察有重要意义。国内有研究报道[24],对35例健康人唾液和血清进行UN、Cr、UA的比较检测及相关性分析,结果显示唾液与血清UN、Cr和UA的相关系数分别为0.613、0.715和0.748。同时还对80例慢性肾功能不全患者进行唾液和血清Cr的测定,结果显示唾液与血清Cr的相关系数为0.561,随着血清Cr浓度的升高,其与唾液Cr的相关性越好。因此,用唾液替代血清检测肾功能参数,对减轻病人痛苦,用于床旁评估透析效果与监测疗效具有积极作用和良好应用前景。4.6运动员的兴奋剂检测法国国家反兴奋剂实验室采用等电聚焦配合化学发光检测的方法,通过对102份冻存尿样和血样进行EPO电泳图的研究结果显示,运动员尿样的EPO电泳图谱与正常内源性EPO的电泳图谱存在显著差异,结果判断清晰。该方法误检率小(0.006%~0.03%),是目前确证EPO阳性的唯一方法[25]。但该方法操作步骤繁琐、人工操作成本大,可检测样品量有限,在方法学上尚需进一步改进。如能利用唾液代替尿样或血样,不但采集方便,而且可以保证实时、当众取样,防

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